SPR顕微鏡 × 製薬企業コラボレーション企画/第3弾 ファイザー【特設ページ】

細胞膜 生体膜 SPR 二次元SPR SPRイメージング 分子間相互作用 相互作用 分子間相互作用計測 相互作用計測 膜タンパク質 膜タンパク タンパク質 タンパク アナライト 抗体 低分子化合物 低分子 糖鎖 レクチン

細胞膜 生体膜 SPR 二次元SPR SPRイメージング 分子間相互作用 相互作用 分子間相互作用計測 相互作用計測 膜タンパク質 膜タンパク タンパク質 タンパク アナライト 抗体 低分子化合物 低分子 糖鎖 レクチン

 

      ▮ 講演の要旨

      CCRL2(ケモカイン(CCモチーフ)受容体様2)は非シグナリング7回膜貫通型受容体で、

      いわゆる非定型受容体(ACKR)である。このACKRは従来型のGPCRとは異なり、G-タン

      パク質シグナル伝達系および細胞遊走のための細胞応答を活性化しない。

      SPR顕微鏡(SPRm)はSPR解析および明視野顕微計測の二つの機能を有するセルベースの

      SPR分子間相互作用解析システムで、細胞全体の膜タンパク質をターゲットとする結合反応

      の非標識リアルタイム計測・解析が可能である。ファイザー社では、他の生物物理学的な解

      析手法とともにSPR顕微鏡を利用して、CCRL2に対するリガンド分子および抗体の結合特性

      の解析を行った。

      本ウェビナーでは、様々な低分子化合物および抗体のセルベース分子間相互作用実験のテク

      ノロジーについて紹介する。

      ▮ 目的

      SPR顕微鏡(SPRm)の原理の説明

      低分子化合物および抗体の結合のケーススタディの紹介

      セルベースの非標識相互作用解析(affinity & kinetics)に関する新規知見の紹介

      ライブセルと固定細胞を使ったリアルタイム計測による分子間相互作用解析

      ▮ 講演の言語

      英語

 

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SPR顕微鏡システム/SPRm 200

 

細胞膜 生体膜 SPR 二次元SPR SPRイメージング 分子間相互作用 相互作用 分子間相互作用計測 相互作用計測 膜タンパク質 膜タンパク タンパク質 タンパク アナライト 抗体 低分子化合物 低分子 糖鎖 レクチン〔セルベースのSPR分子間相互作用計測〕

SPR顕微鏡は、SPRセンサーチップ上で培養・固相化した細胞をリガンドサンプルとして使用します。

細胞の種類は、浮遊細胞および接着細胞のいずれでも使用することができ(細胞サンプル作成プロトコルを提供)、

またPFAなどで固定処理した細胞、ライブセルのいずれでも計測を行うことができます。

〔膜タンパク質の単離・精製が不要〕

SPRセンサーチップ上で培養した細胞をそのままリガンドサンプルして相互作用計測を行うため、

細胞培養完了後すぐに計測プロセスに進むことができます。

本来の機能・構造を有する膜タンパク質との相互作用計測

膜タンパク質の単離・精製を行わずに、細胞そのままの状態で相互作用計測を行うため、

細胞膜に発現している状態、つまり本来の立体構造・機能を有している膜タンパク質との

分子間相互作用解析を行うことができます。

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SPR顕微鏡の計測・解析

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SPR顕微鏡の計測事例
1⃣ 接着細胞 (PFA固定) ⇔ 低分子化合物・抗体・レクチンの相互作用
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ターゲット膜タンパク質を過剰発現させた接着系細胞をSPRセンサーチップ上で培養~PFAで固定処理したものをリガンドプルとして使用するin vitro SPR計測系
細胞膜 生体膜 SPR 二次元SPR SPRイメージング 分子間相互作用 相互作用 分子間相互作用計測 相互作用計測 膜タンパク質 膜タンパク タンパク質 タンパク アナライト 抗体 低分子化合物 低分子 糖鎖 レクチン

2⃣ 接着細胞 (ライブセル) ⇔ 低分子化合物・抗体・レクチンの相互作用 
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SPRセンサーチップ上で培養したターゲット膜タンパク質を過剰発現させた接着系細胞をそのままリガンドプルとして使用するライブセル in vitro SPR計測系

細胞膜 生体膜 SPR 二次元SPR SPRイメージング 分子間相互作用 相互作用 分子間相互作用計測 相互作用計測 膜タンパク質 膜タンパク タンパク質 タンパク アナライト 抗体 低分子化合物 低分子 糖鎖 レクチン

3⃣ 浮遊細胞 (ライブセル) ⇔ レクチンの相互作用 
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SPRセンサーチップ上に固相化したターゲット膜タンパク質を過剰発現させた浮遊系細胞をリガンドプルとして使用するライブセル in vitro SPR計測系
細胞膜 生体膜 SPR 二次元SPR SPRイメージング 分子間相互作用 相互作用 分子間相互作用計測 相互作用計測 膜タンパク質 膜タンパク タンパク質 タンパク アナライト 抗体 低分子化合物 低分子 糖鎖 レクチン

4⃣ 脂質膜小胞 ⇔ 低分子化合物の相互作用 
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SPRセンサーチップ上に固相化したターゲット膜タンパク質をディスプレイさせた脂質膜小胞をリガンドプルとして使用する非細胞 in vitro SPR計測系

細胞膜 生体膜 SPR 二次元SPR SPRイメージング 分子間相互作用 相互作用 分子間相互作用計測 相互作用計測 膜タンパク質 膜タンパク タンパク質 タンパク アナライト 抗体 低分子化合物 低分子 糖鎖 レクチン

5⃣ ターゲット特異的結合の検証 
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ポジティブコントロール、ネガティブコントロールを用いてSPR顕微鏡で検出されるSPR反応がターゲット特異的な相互作用によるものであることを確認

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